Presence of Chlamydia abortus in colostrum, milk, and vaginal discharge samples of sheep

Background: The main transmission route of Chlamydia abortus is by ingesting the microorganism that has been eliminated in vaginal secretions, placental membranes or abortions that contaminate the environment and, possibly, through milk and colostrum. Elimination through vaginal secretions is well documented. However, there are no reports about isolation and identification of C. abortus in the colostrum or milk of infected sheep, so it is important to determine whether or not C. abortus may be present in these secretions, which are the only food of lambs. Objective: To detect C. abortus in colostrum, milk, and vaginal secretions of sheep with a history of reproductive disorders. Methods: Colostrum, milk, and vaginal exudates were collected from 66 sheep. The samples were inoculated in mouse fibroblast cell cultures and the presence of C. abortus determined by direct immunofluorescence. Results: 19 out of 66 colostrum samples (28.7%), 14 out of 66 milk samples (21.2%) and 17 out of 66 vaginal swabs (25.7%) were positive for C. abortus. The 50 samples positive for isolation and detected by immunofluorescence, together with 42 negative samples were subjected to qPCR to amplify a fragment of the ompA gene from C. abortus. Thirty-eight of the 92 samples processed by this technique were positive for C. abortus. Conclusion: The results demonstrated the presence of C. abortus in a high proportion in colostrum, milk and vaginal secretions of infected sheep. To the best of our knowledge, this is the first field study confirming the presence of C. abortus in colostrum, which shows that excretion of Chlamydia by lactogenesis could occur in the first hours after birth.

Antecedentes: La principal vía de transmisión de C. abortus es la ingestión del microorganismo que ha sido eliminado en las secreciones vaginales, membranas placentarias, abortos y, posiblemente, a través de la leche y el calostro. La eliminación a través de secreciones vaginales está bien documentada. Sin embargo, no existen reportes del aislamiento e identificación de C. abortus en el calostro o la leche de ovejas infectadas, por lo que es importante determinar si la bacteria puede o no estar presente en estas secreciones, que son el único alimento de los corderos. Objetivo: Detectar la presencia de C. abortus in calostro, leche y secreciones vaginales de ovejas con antecedentes de problemas reproductivos. Método: Con el propósito de aislar e identificar C. abortus en estas secreciones, se recolectó calostro, leche y exudado vaginal de 66 ovejas. Las muestras fueron inoculadas en cultivos celulares de fibroblastos de ratón y se determinó la presencia de la bacteria por inmunofluorescencia directa. Resultados: Fueron positivas 19 de 66 muestras de calostro (28,7%), 14 de 66 muestras de leche (21,2%) y 17 de 66 hisopos vaginales (25,7%). Las 50 muestras positivas al aislamiento y detectadas por inmunofluorescencia, junto con 42 negativas se sometieron a qPCR para amplificar un fragmento del gen ompA de C. abortus; 38 de las 92 muestras procesadas por esta técnica fueron positivas para C. abortus. Conclusión: Los resultados del presente estudio demostraron la presencia de C. abortus en una alta proporción en el calostro, la leche y las secreciones vaginales de ovejas infectadas. Este es el primer estudio de campo que confirma la presencia de C. abortus en calostro, lo que demuestra que la excreción de clamidia por lactogénesis podría ocurrir en las primeras horas después del nacimiento.

Antecedentes: A principal via de transmissão da Chlamydia abortus é a ingestão do microrganismo que foi eliminado nas secreções vaginais, membranas placentárias ou abortos que contaminam o meio ambiente e, possivelmente, através do leite e colostro. A eliminação pelas secreções vaginais está bem documentada. No entanto, não há relatos de isolamento e identificação de C. Abortus no colostro ou leite de ovelhas infectadas, por isso é importante verificar se a bactéria pode estar ou não presente nessas secreções, único alimento dos cordeiros. Objetivo: Detectar a presença de C. Abortus no colostro, leite e secreções vaginais de ovelhas com histórico de distúrbios reprodutivos Métodos: Para isolar e identificar C. Abortus nessas secreções, foram coletados colostro, leite e exsudato vaginal de 66 ovelhas. As amostras foram inoculadas em cultura de células de fibroblastos de camundongo e a presença da bactéria determinada por imunofluorescência direta. Resultados: 19 de 66 amostras de colostro (28,7%), 14 de 66 amostras de leite (21,2%) e 17 de 66 esfregaços vaginais (25,7%) sendo positivos. As 50 amostras positivas para isolamento e detectadas por imunofluorescência, juntamente com as 42 negativas, foram submetidas a qPCR para amplificar um fragmento do gene ompA de C. Abortus. Trinta e oito das 92 amostras processadas por esta técnica foram positivas para C. Abortus. Conclusão: Os resultados do presente estudo demonstraram a presença de C. Abortus em alta proporção no colostro, leite e secreções vaginais de ovelhas infectadas. Este trabalho é o primeiro estudo de campo na literatura científica confirmando a presença de C. Abortus no colostro, o que mostra que a excreção da clamídia por lactogênese pode ocorrer nas primeiras horas após o nascimento.

Análisis de riesgos de la brucelosis en el estado de Tlaxcala / Risk analysis of brucelosis in the state of Tlaxcala

Objetivo. Identificar los riesgos de la brucelosis en el estado de Tlaxcala, México. Material y métodos. Se realizó un diagnóstico de tipo social en los municipios de Huamantla, Ixtenco y Teacalco, localizadas en la región oriente del estado. Se determinó la seroprevalencia de brucelosis en cabras y humanos. Resultados. El 46.9% de productores conoce los programas de la vacunación contra brucelosis; 19.7% aplica vacuna y 80.3% no aplica vacuna. Huamantla presentó la mayor seroprevalencia de brucelosis animal en 66.8 por ciento. San José Teacalco distribuye y comercializa quesos no pasteurizados en una distancia mayor de 270 km, lo que amplía los riesgos de contagio por brucelosis. Ixtenco registró la mayor prevalencia de brucelosis en humanos con 1.51 por ciento. Conclusión. Los municipios estudiados presentan riesgos de contagio y propagación de la brucelosis.

Objective. To identify the risk of brucellosis in the state of Tlaxcala, Mexico. Materials and methods. A diagnosis of social type was conducted in the municipalities of Huamantla, Ixtenco and Teacalco, located in the eastern region of the state. The seroprevalence of brucellosis in goats and humans was determined. Results. 46.9% of producers know the programs of vaccination against brucellosis; 19.7% apply the vaccine and 80.3% do not apply the vaccine. Huamantla had the highest seroprevalence of animal brucellosis in 66.8%; San Jose Teacalco distributes unpasteurized cheeses to a distance of 270 km, increasing the risk of infection with brucellosis. Ixtenco recorded the highest prevalence of brucellosis in humans, with 1.51%. Conclusion. The municipalities studied present risks of infection and spread of brucellosis.

Transmisión de Brucella abortus en becerras menores de tres meses diagnosticadas por medio de las pruebas de tarjeta e inmunodifusión radial en dos hatos lecheros del estado de Querétaro / Transmission of Brucella abortus to female calves younger than three months of age, diagnosed by the card and radial immunodiffusion tests in two dairy herds in the state of Queretaro, Mexico

La transmisión de Brucella abortus a becerras de vacas positivas y negativas se determinó a la primera semana de vida y al tercer mes de edad. Se trabajó con dos hatos: el hato 1, con 670 vacas en producción, presentaba una seroprevalencia a brucelosis de 21.6% (145/670). En este hato se formaron dos grupos: vacas positivas y vacas negativas, como resultado de las pruebas de tarjeta y de inmunodifusión radial (IDR) realizadas con hapteno nativo. Se tomaron pruebas de sangre de las vacas en dos ocasiones, a la semana de edad y antes de que los animales fueran vacunados contra B. abortus. De las 22 vacas del grupo positivo, 2 (9.1%) becerras resultaron positivas a la primera semana de vida, pero no se encontraron vacas positivas a los tres meses de edad. En el grupo de becerras nacidas de vacas negativas no se encontraron animales positivos a la semana de vida, pero a los tres meses de edad, 4 de las 22 becerras resultaron positivas con la prueba de IDR. La tasa de prevalencia de vacas positivas a B. abortus fue de 13.6% a los tres meses de edad. De las 20 muestras de leche obtenidas de este hato se aisló B. abortus (100%). Mediante PCR se confirmó que estas cepas correspondían a cepas de campo y no a cepas vacunales. El hato 2, con 1800 vacas en producción, estaba inscrito en la campaña nacional contra la brucelosis animal y presentaba una seroprevalencia de 1.94% (35/1800) detectada de enero a diciembre de 2009. Se analizaron 1 170 registros usando los resultados de las pruebas de tarjeta y rivanol aplicada en becerras menores de tres meses de edad, de las que 24 (2.1%) resultaron positivas a B. abortus de enero de 2009 a junio de 2010. Se concluye que es necesario realizar el diagnóstico de brucelosis en becerras nacidas en establos donde se ha presentado la enfermedad, para prevenir que permanezcan animales positivos en el hato, ya que los anticuerpos posvacunales impedirán detectar la enfermedad, pero posteriormente se manifestará mediante abortos durante la primera gestación, perpetuando así la brucelosis en el establo.

Transmission of Brucella abortus to female calves from positive and negative cows was determined in the first week and third month of age. Two herds were used. Herd 1 consisted of 670 milking cows with a brucellosis seroprevalence of 21.6% (145/670). In this herd, groups of positive and negative cows were formed using the card and radial immunodifussion (RID) tests with native hapten. Blood samples were taken from female calves on two occasions: at one week of age and before animals were vaccinated against B. abortus. Of the 22 calves from the positive group, two (9.1%) were positive in the first week of life, but no more positive calves were found at three months of age. In the group of female calves born to negative cows, there were no positive animals at one week of age, but four out of 22 were found positive with the RID test at three months of age. A prevalence rate of 13.6% of positive calves for B. abortus in the third month of age was calculated. Twenty milk samples were obtained from this herd and B. abortus was isolated from all of them (100%). Using PCR, the strains found were confirmed to be field strains and not vaccine strains. Herd 2 consisted of 1800 milking cows, participating in the National Campaign against Animal Brucellosis, that had a seroprevalence of 1.94% (35/1800) detected from January to December 2009. In this herd, 1 170 records were analyzed using the results of the card and rivanol tests obtained from female calves younger than three months of age, of which 24 (2.1%) were found positive for B. abortus from January 2009 to June 2010. It is concluded that the diagnosis of brucellosis is necessary in female calves born in dairies to cows that have the disease, in order to prevent positive animals from remaining in the herd. Vaccine-induced antibodies will avert disease detection, but brucellosis will later manifest itself through abortions during first pregnancies, thus perpetuating the disease in dairies.

Detección de Mycobacterium avium subespecie paratuberculosis, por medio de PCR-anidada a partir de muestras de heces de ovinos / Detection of Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis by nested-PCR of ovine fecal samples

Paratuberculosis is a chronic granulomatous enteritis caused by Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis (Map), which affects wild and domestic ruminants. Map is shed in feces from infected animals. Transmission of the infection takes place by oral ingestion of the bacterium from contaminated food and water with feces. With the objective to establish a paratuberculosis diagnosis in ovine by nested-PCR from fecal samples, 204 fecal and serum ovine samples were studied. Feces were evaluated by nested-PCR and bacterial culture, serum samples were analyzed by agar gel immunodiffusion (AGID). Nested-PCR yielded a 210 bp amplification product that corresponds to Map-IS900, in 61 out of 204 samples. From these, 43 were from AGID positive animals and 18 from negative animals. Seventeen Map strains were isolated by bacterial culture and AGID detected 91 positive animals. Nested-PCR allowed to detect, sooner, greater number of animals shedding bacillus, even when they had resulted negative to the serological test. This result is considered important because generally these animals, while remaining in the farm, constitute the main source of infection for the herd. Nested-PCR should be considered as an alternative, when a prompt result is required to know the health status of the herd with respect to paratuberculosis.

La paratuberculosis es una enteritis granulomatosa de curso crónico ocasionada por Mycobacterium avium subespecie paratuberculosis (Map), afecta a rumiantes domésticos y silvestres. Map es excretada en las heces de animales que desarrollan la enfermedad, y la transmisión de la infección se da mediante la ingestión de alimentos y agua contaminados por heces de animales infectados. Con el objetivo de establecer el diagnóstico de paratuberculosis en ovinos por medio de la PCR-anidada a partir de muestras de heces, se trabajaron 204 muestras de heces y sueros de ovinos; las heces se evaluaron por PCR-anidada y cultivo bacteriológico, las muestras de sueros fueron analizadas por medio de inmunodifusión en agar gel (lDGA). Con la PCR-anidada se obtuvo un producto de amplificación 210 pb que corresponde a la IS900 de Map, en 61 de las 204 muestras. De éstas, 43 eran de animales positivos a IDGA y 18 negativos. Mediante cultivo bacteriológico se aislaron 17 cepas de Map; en este contexto, la IDGA detectó a 91 animales como positivos. La PCR-anidada permitió detectar en menor tiempo a mayor cantidad de animales que estaban eliminando al bacilo, aun cuando habían resultado negativos a la prueba serológica; este resultado se considera importante, ya que generalmente estos animales, al permanecer dentro de la granja, constituyen la principal fuente de infección para el rebaño. Se debe considerar a la PCR-anidada como alternativa, cuando se requiera el diagnóstico en breve tiempo, para conocer el estado sanitario del rebaño con respecto a paratuberculosis.

Identificación y tipificación de biotipos y serotipos de Yersinia enterocolitica / Identification and typing of Yersinia enterocolitica biotypes and serotypes isolated

OBJETIVO: Conocer la existencia de Yersinia enterocolitica en suínos visiblemente sanos y sacrificados para el consumo humano. MÉTODOS: Fueron estudiadas 100 muestras de tejido linfático obtenidas en el momento del sacrifício, en un matadero del Estado de México. Fueron realizados muestreos pilotos de 20 casos, de los cuales 20 por cento fueron positivos, permitiendo obtener una muestra estudiada (n=100). Las muestras colectadas de tejido linfático fueron acondicionadas para el aislamiento de Yersinia enterocolitica en caldo de Rappaport y en medio de cultivo de Salmonella-Shigella y MacConkey. Las identificaciones fueron efectuadas por medio de pruebas bioquímicas y serológicas, utilizándose en el caso los antisueros O:3, O:8 y O:9 para la biotipificación correspondiente. RESULTADOS: Fueron obtenidos 22 aislamientos tipificándose 8 serotipos pertenecientes al O:3 y 8 al O:9 correspondientes al biotipo 1; y, en 6 muestras no fue posible la serotipificación. No se encontró en el total de los aislados el serotipo O:8. CONCLUSIONES: En base en la metodología, se registró la presencia de Y. enterocolitica y sus serogrupos en tejido linfático de porcinos por la primera vez en México; esto es importante porque el patógeno y sus serotipos aislados están comprometidos con mayor frecuencia con problemas de salud pública

Evaluación de la prueba de rivanol para el diagnóstico de brucelosis en caprinos / Evaluation of rivanol test for diagnosis of brucellosis in goats

El objetivo del presente trabajo fue evaluar la prueba de rivanol para el diagnóstico de brucelosis caprina, determinando su sensibilidad y especificidad. La prueba se realizó con antígeno comercial de Brucella abortus, utilizando las diluciones 1:25, 1:50, 1:100, 1:200 y 1:400. Para determinar la sensibilidad se utilizaron 64 sueros de caprinos con infección demostrada por aislamiento de B. melitensis, la especificidad se evaluó con 50 sueros de caprinos procedentes de hatos y de zonas libres de brucelosis. La especificidad en cabras vacunadas se obtuvo usando sueros de 22 cabras jóvenes de 3 a 4 meses de edad vacunadas con dosis clásica (1 x 109 ufc/ml) de Rev 1 B. melitensis por vía subcutánea y 59 cabras adultas vacunadas con dosis reducida (1 x 105 ufc/ml) de Rev 1 por vía subcutánea, a partir de los cuales se colectaron muestras serológicas los días 7, 15, 30, 60, 90, 120, 150, 180 y 210 posvacunación. Del grupo de animales infectados 54 sueros resultaron positivos con títulos que variaron de 1:25 a 1:400, resultando la sensibilidad de 83 por ciento. El grupo de caprinos procedentes de zonas libres de brucelosis no presentó ningún resultado positivo, por lo que la especificidad fue del 100 por ciento. El grupo de cabras jóvenes vacunadas con dosis clásica presentó de los 7 a los 90 días 100 por ciento de reactores; a los 120 y 150 días, 27 por ciento; de los 180 a los 240 días, 9 por ciento. Los sueros de cabras vacunadas con dosis reducida reaccionaron 100 por ciento de los 7 a los 90 días; a los 120 y 150 días, 35 por ciento; a los 180 días, 21 por ciento; y a los 210 y 240 días, 6 por ciento de positivos. Se concluye que la prueba de rivanol no ofrece ninguna ventaja para ser utilizada en el diagnóstico de la brucelosis caprina como prueba confirmatoria.

Prueba de tarjeta modificada para el diagnóstico de la brucelosis caprina / Evaluation of the modified card test for diagnosis to goat brucellosis

El objetivo de este trabajo fue evaluar la sansibilidad y la especificidad de dos antígenos para la prueba de tarjeta utilizadas en el diagnóstico de la brucelosis caprina. Se usó el antígeno rosa de Bengala, que tiene una concentración celular del 8 por ciento y un antígeno experimental preparado a una concentración celular del 3 por ciento. Ambos antígenos se prepararon utilizando la cepa 119.3 de B. abortus, con solución amortiguadora de lactado con pH3.6. La sensibilidad de la prueba de tarjeta con ambos antígenos se determinó usando 53 sueros de caprinos con aislamiento bacteriológico de B. melitensis. Para determinar la especificidad se utilizaron 100 sueros de caprinos negativos a brucelosis, procedentes de zonas libres. La sensibilidad del antígeno rosa de Bengala al 8 por ciento es inadecuado en carpinos debido a su baja sensibilidad, por lo que es recomendable la utilización del antígeno rosa de Bengala preparado a una concentración del 3 por ciento

Epididimitis ovina: estudios bacteriológico y serológico / Ovine epididymytis a Bacteriological and serological studies

La brucelosis en ovinos puede ser causada por Brucella ovis y por brucelas lisas, en ambos casos puede presentarse epididimitis u orquitis, las cuales también se asocian con otros agentes infecciosos como Actinobacillus seminis e histophilus ovis. El objetivo de este trabajo fue aislar e identificar los agentes bacterianos involucrados en la epididimits ovina y establecer la relación en el diagnóstico serológico y bacteriológico de brucelas lisas, de B. ovis Y A. seminis con la presencia de epididimitis clínica. Se trabajó en 6 rebaños ovinos localizados en los estados de México, Hidalgo y el Distrito Federal, se tomaron muestras de suero de 111 machos, y muestras de semen y testículos de 17 carneros. La presencia de epididimitis se determinó por palpación y observación. A los sueros se les aplicó la prueba diagnóstica de tarjeta al 3 por ciento para brucelas lisas, las pruebas de ELISA indirecta e inmunodifusión doble (IDD) con el antígeno proteínico de extracción salina caliente para B. ovis, e IDD con antígeno solubre para A. seminis. Se realizó análisis bacteriológico a las muestras de semen y testículos de machos con epididimitis, a las cepas aisladas se les efectuaron pruebas de identificación bioquímica rutinarias; para A. seminis se realizó además IDD con antígeno obtenido por lisis de cepas aisladas y de referencia. En los 6 rebaños se diagnósticó la presencia de anticuerpos para B. ovis, por IDD, se encontraron 10 positivos (9.0 por ciento), en ELISA indirecta se obtuvieron 25 sueros positivos (22.5 por ciento), para brucelas lisas se encontraron 20 sueros positivos (18.01 por ciento). Para A. seminis se identificaron 10 seros positivos (9.0 por ciento), pertenecientes a 3 de los 6 rebaños muestreados. Se lograron aislar dos cepas de B. ovis a partir de testículos, y de dos cepas de A. seminis de semen

Presencia de anticuerpos contra diferentes especies de Brucella en sementales ovinos jóvenes / Presence of antibodies against different Brucella species in young rams

En México se desconoce la distribución de la brucelosis ovina causada tanto por Brucella ovis como por brucelas lisas (B. abortus y B. melitensis); en este sentido el objetivo de este trabajo fue determinar la presencia de anticuerpos contra B. ovis y brucelas lisas, en sementales ovinos jóvenes, de ocho diferentes estados de la República mexicana. Se obtuvieron 622 sueros de ovinos machos, de las razas suffolk, Blakbelly, Hampshire y Pelibuey, de entre seis y 11 meses de edad, pertenecientes a 39 diferentes rebaños. Para el diagnóstico de B. ovis se empleó la prueba de inmunodifusión doble en agar usando como antígeno un extracto salino. Las pruebas utilizadas para la detección de anticuerpos contra brucelas lisas fueron la de tarjeta, con dos diferentes concentraciones celulares del antígeno (3 por ciento y 8 por ciento) y la de fijación de complemento. Los reactores positivos a la prueba de inmunodifusión fueron 15, que representaron 2.4 por ciento; hubo ocho rebaños con animales positivos, esto correspondió al 20.5 por ciento. Respecto de las brucelas lisas el número de reactores a la prueba de tarjeta al 8 por ciento de cc fue de 5 (0.8 por ciento), mientras que con antígeno al 3 por ciento de cc el número de reactores fue de 17 (2.7 por ciento). A la prueba de fijación del complemento presentaron reacción positiva 3 sueros (0.48 por ciento). Los datos obtenidos en el presente estudio ponen de manifiesto que las infecciones causadas tanto por B. ovis como por brucelas lisas, se encuentran presentes en porcentajes que deben tomarse en consideración por lo programas de control de la enfermedad